Vi udviklede en metode baseret på væskekromatografi
med tandem-massespektrometri til kvantificering af de individuelle enantiomer
af metadon og dets primære metabolit, R/S-2-ethyl-1,5-dimethyl-
3,3-diphenylpyrrolinium (EDDP), i postmortem blod og hjernevæv. Prøvebehandlingen blev udført på et Tecan Evo robotsystem. Udfældning blev efterfulgt af fastfase-ekstraktion, inddampning og rekonstituering i den mobile fase. Enantiomerne var fuldt
adskilt med væskekromatografi på en chiral a-(1)-syreglycoprotein kolonne. En Quattro mikro massespektrometer blev anvendt til detektion i positiv ion-mode med en elektrospray-kilde. Den nedre grænse for kvantificering i hjernevæv var 0,005 mg/kg for metadon og 0,001 mg/kg for EDDP enantiomerne; den maksimale præcision var 17% for begge stoffer, korrektheden varierede fra 94 til 101%. I blod, var kvantificeringsgrænsen 0,001 mg/kg for alle stoffer, den samlede relative standardafvigelse var <15%, og korrekthed varierer fra 95 til 109%. Hjerne- (n=11) og blod-(n=15) prøver blev analyseret med intermediær korrekthed varierende fra 7,5 til 15% ved 0,005 mg/kg og 6,8 til 11,3% ved 0,25 mg/kg for alle stoffer. Metode blev udvikling med fokus på fremstilling af en ren ekstrakt, især fra hjerneprøver. Metoden blev testet på autentisk hjerne og femorale blodprøver